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CRISPR/Cas9基因编辑服务

CRISPR/Cas9是在细菌和古生菌中发现的一种核酸酶,能够特异性的切割DNA序列,从而在真核细胞中实现基因改造。

相比ZFN与TALEN系统,CRISPR/Cas9的优点有:

1、高效且高特异性的基因编辑

2、极高的灵活性,可切割几乎任一基因

3、简单易用,成本低

4、可同时编辑多个基因靶点

基因编辑优点.png


基因编辑科研服务:

客户需要提供:

宿主细胞相关信息及材料:

P宿主细胞的名称和ATCC 编号

P宿主细胞的培养基配方,已经尝试过的转染方法(可选)

目标基因相关信息:

P基因敲除:敲除基因ID,预敲除基因的致死性(重要!)

P基因敲入:敲入DNA 序列,敲入位点

P点突变:点突变位置及碱基变化

我们会交付:

P无支原体污染的野生型宿主细胞

P两周一次的阶段性更新及各阶段结果的电子报告

P可直接用于文章撰写的项目总报告

P冻存或常温寄送的基因编辑单克隆细胞株


1. 单基因敲除单克隆细胞株构建服务

a) 描述:与RNAi 不同,CRISPR 基因编辑技术可以对细胞内特定基因进行完全敲除,因此基因敲除单克隆细胞株是研究基因及IncRNA 功能的重要细胞模型。克睿基因通过优化CRISPR 基因编辑系统及其应用方法,建立了快速、标准化的基因敲除单克隆细胞构建流程,服务交付周期仅为4到8周。

b)优势:

i. 交付周期仅为4-8 周

ii. 标准化流程及完整的QC 体系,包含8 个质检项目,项目交付率达100%

iii. 在原代细胞/细胞系、贴壁/悬浮细胞中均可高效敲除指定基因

iv. 可实现单基因敲除、大片段DNA 切除、敲除lncRNA 等多种基因编辑方式

c)服务内容

序号
项目阶段
时间
服务内容
交付材料
I宿主细胞质检1-2 周

细胞状态检测

目标基因检测

《宿主细胞质检报告》
II

sgRNA 制备与

质检

1-2 周

sgRNA 设计与制备

sgRNA 质检及筛选

《gRNA 质检报告》
III

单克隆的培养

与筛选

1-3 周

单克隆细胞培养

单克隆细胞鉴定

1 株基因敲除单克隆细胞;

《项目总报告

IV单克隆质检及

交付

1 周

交付单克隆质检

交付准备


2. 基因定点敲入单克隆细胞株构建服务

a) 描述:基因定点敲入单克隆细胞株是研究基因功能及示踪目标蛋白的重要细胞模型。与慢病毒介导的随机插入不同,CRISPR 基因编辑系统能够通过制造DNA 断裂及同源重组过程,将特定的DNA 序列插入至基因组的指定位点,实现插入序列可控且稳定的表达。克睿基因通过优化CRISPR 基因编辑系统及其应用方法,建立了快速、标准化、普适性的基因定点敲入单克隆细胞株构建流程,不仅能够实现5kb DNA 片段的敲入,而且服务交付周期仅为8 到14 周。

b) 优势:

i. 交付周期仅为8-14 周

ii. 标准化流程及完整的QC 体系,包括12 个质检项目,项目交付率达100%

iii. 在贴壁/悬浮细胞中均成功将特定DNA 序列敲入指定基因组位点

iv. 可在外显子、内含子、终止密码子附近等多种基因组区域实现基因敲入

v. 可敲入长达5kb 的DNA 片段

c)服务内容


序号
项目阶段
时间
服务内容
交付材料
I

宿主细胞质

1-2 周

细胞状态检测

插入位点检测

《宿主细胞质检报告》
IIsgRNA 制备与质检

1-2 周

sgRNA 设计与制备

sgRNA 质检及筛选

基因编辑质粒构建及测序

《sgRNA 质检报告》
III

Donor 质粒

构建与质检

2-4 周

敲入序列设计及合成

Donor质粒构建及测序

基因敲入效率初步评价

《Donor质粒质检报告》
IV

单克隆的培

养与筛选

3-5 周

单克隆细胞培养

单克隆细胞鉴定

1 株基因敲入单克隆细胞;

《项目总报告》

V

单克隆质检

及交付

1 周

交付单克隆质检

交付准备

总计

8-14 周






3. 点突变单克隆细胞株构建服务

a) 描述:基因点突变作为基因异常的一种形式,是多种疾病发生恶化的关键驱动因素。点突变单克隆细胞株是探索基因突变生理及病理意义的重要细胞模型。CRISPR 基因编辑系统能够通过制造DNA 断裂及同源重组过程,利用含有点突变的DNA 序列作为模版,在目标基因组位点实现点突变。基因定点敲入单克隆细胞株是研究基因功能及示踪目标蛋白的重要细胞模型。克睿基因通过优化CRISPR 基因编辑系统及其应用方法,建立了快速、标准化、普适性的点突变单克隆细胞株构建流程,服务交付周期仅为12 到16 周。

b)优势:

i. 交付周期仅为12-16 周

ii. 标准化流程及完整的QC 体系,包括13 个质检项目,项目交付率达100%

iii. 在贴壁/悬浮细胞中均可在特定的碱基位点实现定向突变

iv. 可在外显子、内含子、终止密码子附近等多种基因组区域实现基因点突变

c)服务内容


序号项目阶段时间服务内容交付材料
I宿主细胞质检1-2 周

细胞状态检测

点突变位点检测

《宿主细胞质检报告》
II

sgRNA 制备

与质检

1-2 周

sgRNA 设计与制备

sgRNA质检及筛选

基因编辑质粒构建及测序

《sgRNA质检报告》
III

Donor 质粒

构建与质检

3-4 周

Donor 序列设计及合成

Donor质粒构建及测序

点突变效率初步评价

《Donor质粒质检报告》
IV

单克隆的培

养与筛选

6-7 周

单克隆细胞培养

单克隆细胞鉴定

1 株点突变单克隆细胞;

《项目总报告》

V

单克隆质检

及交付

1 周

交付单克隆质检

交付准备

总计

12-16 周






















4. “多基因同时敲除”、“原代细胞基因敲除”、“利用dCas9-VP64 激活内源基因表达”等项目需进行评估后方可报价,服务内容也会根据具体案例来定制化。