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蛋白质组芯片技术应用于移植排斥标志物筛选

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  慢性同种异体移植损伤(CAI)是体液与免疫原性抗原反应不匹配的结果,人类白细胞抗原(HLA)的抗体及non-HLA自身抗体都可以促进CAI发展。在非极性排斥反应条件下,CAI对HLA抗体水平影响较小,故研究者在该研究中将重点放在non-HLA自身抗体上。

如何快速找到CAI的特异性Non-HLA自身抗体呢?

  通过综合方法进行Discovery set 筛选。研究人员利用人类蛋白质组芯片检测10个CAI患者和10个非CAI患者在移植后0、6、24小时的60个血清样本,数理统计分析发现CAI患者组有111个显著变化的non-HLA自身抗体,其中40个抗体上调极显著,部分non-HLA自身抗体24小时的动力学变化水平如图1。后续研究者又分析了98个移植病人的172个活检样本的CADI值,结果显示有68个CAI患者,30个非CAI患者。

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  后续研究者通过validation set进行标志物验证。利用反向ELISA法检测分析MIG、ITAC、CSNK2A2、PDGFRA四个non-HLA自身抗体标志物水平。横向分析检测移植12个月后31个CAI患者和30个非CAI患者的抗体标志物水平,纵向分析检测移植0、6、24个月后另外17个CAI患者的抗体标志物水平,发现CAI患者样本中抗体标志物水平显著增加,见图2。

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  后续研究者通过免疫组化鉴定四个抗体标志物对应的抗原蛋白在肾组织中也显著高表达,如图3,进一步确定non-HLA自身抗体可以作为潜在的CAI标志物。

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    Spearman相关性分析证实non-HLA自身抗体与CADI指数正相关,这些抗体与不同时间点的样本CAI严重程度相关,移植前期和移植后期CAI发展过程中都可以追踪这些抗体水平。ROC曲线预测6个月和24个月CAI的发展,结果显示较高的特异性和敏感性,如图4。

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小结

    non-HLA自身抗体促进慢性同种异体移植损伤(CAI)的发展,但目前对其研究甚少。研究者应用人类蛋白组芯片进行Discovery set实验,高效地筛选到移植病人血清样本与匹配的活检样本中的non-HLA自身抗体。后续通过Validation set实验验证,将重点放在MIG、ITAC、CSNK2A2、PDGFRA四个non-HLA自身抗体标志物上,证实其与CAI的发展极其相关,且对临床预测CAI的发展具有高敏感性和特异性,对疾病的诊断治疗具有重要意义。

技术路线

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文章分类: 蛋白芯片