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KAPA血液直接PCR试剂盒



1、优点

(1)从新鲜血液、4℃保存2年以上EDTA抗凝的全血、FTA®Elute卡、Whatman903样本收集纸(“Guthrie卡”)或常规滤纸血片中直接扩增目的DNA。

(2)无需DNA提取,降低污染风险,缩短时间与节约成本。

(3)与现有的操作流程、实验步骤、常规检测手段兼容。


2、用途

(1)人类、其他哺乳动物和鸟类基因分析;

(2)GC含量<65%,扩增长度3.5kb;GC含量>65%,扩增长度1kb;

(3)可用于常规检测;限制性酶切、琼脂糖凝胶电泳/EB染色、荧光毛细管电泳、DNA测序或dHPLC分析;

(4)特别适合PowerPlex16 System(Promega)进行亲子鉴定;

(5)SNP分析(限制性酶切法)。


3、全血直接扩增

目前的Taq酶无法做到直接从全血中扩增目的DNA片段,主要无法克服血中抑制因子对Taq酶的干扰抑制。KAPA血液DNA聚合酶经过血液抑制剂处理进化,可以从血液中直接扩增目的DNA片段,无需经过预处理或DNA提取。


4、亲自鉴定、微卫星(STR)分析


5、全血限制性酶切分析


6、其他物种的实验

 该试剂盒亦可用于其他非人类的物种,如哺乳动物、鸟类、还可以用于兽医PCR检测。其他物种的血液收集方式与人类的相同。不同的物种的用血量要根据经验来调整。例如,小鼠的用血量远远低于,0.1-5%v/v即可。鸟类血液中含“有核细胞”,所以应通过预实验,将鸟血应稀释成含有接近人类DNA量的浓度。


7、反应参数

1)推荐反应条件

2)充分混合反应体系,稍离心使试剂成份落到管子底部,开始反应;

3)GC含量<65%,扩增长度3.5kb;GC含量>65%,扩增长度≤1k,同时要加入5%DMSO;扩增长片段,加入0.1%(v/v)吐温20效果更佳;

4)本试剂盒仅适用于EDTA抗凝血,其他如肝素钠、柠檬酸、ACD等抗凝素效果不佳;其他样品如口腔拭子、羊水也有不错实验结果报道;

5)人类:反应体系中含有1-20%v/v血,非人类其他物种用血量要通过试验确定,含“有核细胞”的血(如鸟血)要经过稀释,直到达到人类血液DNA浓度为止;

6)PCR产物分析之前,14000-17000g,5min,离心PCR产物,弃掉沉淀颗粒;

7)限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析之前,用试剂盒纯化PCR产物;

8)用本试剂盒可直接扩增出血液中病原体的基因片段,但不推荐用于疾病诊断;

9)该体系中的酶为非热启动酶,常温下有活性,尽量在冰上操作;

10)本试剂盒不适用于SYBR®Green法与Taq探针法荧光定量PCR检测。


8、产品信息

货号
产品
规格
说明书
KK7002
血液直接扩增试剂盒A
500x25μl
下载
KK7003
血液直接扩增试剂盒B500x25μl
KK7004
血液直接扩增试剂盒A1000x25μl
KK7005
血液直接扩增试剂盒B1000x25μl