KAPA血液直接PCR试剂盒1、优点 (1)从新鲜血液、4℃保存2年以上EDTA抗凝的全血、FTA®Elute卡、Whatman903样本收集纸(“Guthrie卡”)或常规滤纸血片中直接扩增目的DNA。 (2)无需DNA提取,降低污染风险,缩短时间与节约成本。 (3)与现有的操作流程、实验步骤、常规检测手段兼容。 2、用途 (1)人类、其他哺乳动物和鸟类基因分析; (2)GC含量<65%,扩增长度3.5kb;GC含量>65%,扩增长度1kb; (3)可用于常规检测;限制性酶切、琼脂糖凝胶电泳/EB染色、荧光毛细管电泳、DNA测序或dHPLC分析; (4)特别适合PowerPlex16 System(Promega)进行亲子鉴定; (5)SNP分析(限制性酶切法)。 3、全血直接扩增 目前的Taq酶无法做到直接从全血中扩增目的DNA片段,主要无法克服血中抑制因子对Taq酶的干扰抑制。KAPA血液DNA聚合酶经过血液抑制剂处理进化,可以从血液中直接扩增目的DNA片段,无需经过预处理或DNA提取。 4、亲自鉴定、微卫星(STR)分析 5、全血限制性酶切分析 6、其他物种的实验 该试剂盒亦可用于其他非人类的物种,如哺乳动物、鸟类、还可以用于兽医PCR检测。其他物种的血液收集方式与人类的相同。不同的物种的用血量要根据经验来调整。例如,小鼠的用血量远远低于,0.1-5%v/v即可。鸟类血液中含“有核细胞”,所以应通过预实验,将鸟血应稀释成含有接近人类DNA量的浓度。 7、反应参数 1)推荐反应条件 2)充分混合反应体系,稍离心使试剂成份落到管子底部,开始反应; 3)GC含量<65%,扩增长度3.5kb;GC含量>65%,扩增长度≤1k,同时要加入5%DMSO;扩增长片段,加入0.1%(v/v)吐温20效果更佳; 4)本试剂盒仅适用于EDTA抗凝血,其他如肝素钠、柠檬酸、ACD等抗凝素效果不佳;其他样品如口腔拭子、羊水也有不错实验结果报道; 5)人类:反应体系中含有1-20%v/v血,非人类其他物种用血量要通过试验确定,含“有核细胞”的血(如鸟血)要经过稀释,直到达到人类血液DNA浓度为止; 6)PCR产物分析之前,14000-17000g,5min,离心PCR产物,弃掉沉淀颗粒; 7)限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析之前,用试剂盒纯化PCR产物; 8)用本试剂盒可直接扩增出血液中病原体的基因片段,但不推荐用于疾病诊断; 9)该体系中的酶为非热启动酶,常温下有活性,尽量在冰上操作; 10)本试剂盒不适用于SYBR®Green法与Taq探针法荧光定量PCR检测。 8、产品信息
文章分类:
KAPA直接扩增、DNA快速提取
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