KAPA HiFi高保真酶及Ready Mix

1、KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶，分热启动版和非热启动版，保真性强，活力超高。具有以下特点：

1）超高保真，通过大规模二代测序得出的出错率：2.8×10-7

2）可以扩增各种复杂模板；

3）扩增片段长，扩增基因组可达15kb，质粒DNA或噬菌体DNA可达18kb；

4）扩增速度快，节省75%以上的时间；

5）KAPA高保真热启动酶，含有2中buffer，分别用于常规模板和高难度模板。

2、应用

1）基因定点突变；2）测序；3）蛋白表达。

3、产品表现

1）超级保真、灵敏

2）扩增复杂模板————无可匹敌

3）退火温度对条带特异性的重要性

4、PCR反应

1）推荐反应体系

2）推荐反应参数

注意事项：

1）HiFi Buffer中盐离子浓度较高，影响DNA变性/退火，所以复杂模板需要较长的变性温度，5分钟；GC Buffer主要针对高GC或稳定二级结构的模板，仅当HiFi Buffer效果不佳时使用，但其会降低保真性；

2）每个循环中变性条件为：98℃20s；

3）**退火温度需通过梯度PCR优化得到；根据Tm值设定最低的退火温度，然后若要增加灵敏度可每次提高1℃，若要提高特异性每次降低1℃；

4）推荐延伸时间：30s/kb；若模板浓度高，可降低延伸时间，但较长的延伸时间会增加实验的灵敏度和产量；

5）推荐25个或更少的循环数，若起始模板浓度低或扩增效率偏低导致产量不高，可增加至30-35个循环；

6）该体系可扩增≥10kb的目的基因片段。若实验对MgCl2有特殊要求，请进行梯度试验，每次增加或减少0.25mM；

7）根据实验要求可调整HiFi酶的浓度，范围：0.25U-1.0U/25μl；

8）末端加A，HiFi高保真酶扩增产物是平末端，若要连接到T载体上，扩增产物纯化后用KAPA Taq DNA酶进行72℃延伸，因为未纯化的产物中含有HiFi酶，其校对活性影响加A效果。

5、问题及解决方案

6、产品信息