简介

基因的功能性缺失，是寻找与表型相关特定基因靶点的重要方法。CRISPR/Cas9可以通过特定的sgRNA高特异性地靶向目的DNA序列，造成指定位点的DNA双链断裂，从而引入Indel（Shortinsert/deletion）突变，导致目的基因的功能完全缺失。近年来对CRISPR/Cas9系统的优化和改进，使得基因敲除的效率和特异性进一步提高，在某些领域已经逐步取代传统的RNAi技术。

公司在最新的CRISPR/Cas9技术基础上开发了一套Quick-KO系统，能够高效、快速并且低成本地实现细胞的基因敲除，针对几十到几百个目的潜在靶点基因进行筛选，能够在2~3个月内完成批量的单基因敲除细胞株的构建，较全基因组文库筛选，可有效缩小范围，提高研究效率。

方法

客户提供潜在靶点基因清单，派致根据目的基因设计sgRNA，通过Quick-KO平台进行基因敲除细胞系构建，在敲除株的基础上进行功能筛选，通过抗性分析或者marker基因报告系统进行筛选结果的分析。

　　步骤

1. 明确筛选细胞和靶点清单

2. 设计sgRNA

3. 对目的细胞进行检测（支原体检测，单克隆形成率检测，转染效率检测）

4. Quick-KO系统进行单克隆敲除株构建

5. 药物筛选

6. 细胞活性分析

7. 撰写基因筛选报告

　　后续可进行实验

1. 针对筛选的基因敲除细胞株进行裸鼠成瘤（CDX）模型建立

2. CDX小鼠目的药物的治疗

3. 检测肿瘤生长状况，在体评估筛选到的目的基因。