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基于CRISPR/Cas9的DNA甲基化修饰细胞系定制

技术简介:

甲基化是表观修饰的重要部分,DNA甲基化可以引起DNA构象、稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而影响基因表达。DNA链中含有很多CpG结构,双链DNACpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化,基因组中60~90%的CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇出现在基因启动子核心序列或者转录起始位点。

DNA甲基化转移酶可以催化CpG的甲基化反应。DNA甲基化转移酶有两种,Dnmt1是一种持续性甲基化转移酶,作用于只有一条链甲基化的DNA双链,使其完全甲基化,参与DNA复制过程中新合成链的甲基化修饰;Dnmt3a/Dnmt3b是一种从头甲基化转移酶,可以在CpG上产生新的甲基化修饰,首先半甲基化,继而全甲基化,该甲基化转移酶可能参与细胞生长分化的调控,在肿瘤基因甲基化中起到重要作用。

近年来CRISPR/Cas9技术得到快速发展,在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一个Dnmt3a,能够通过dCas9介导特定位点的甲基化修饰,调控相关基因的表达。

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技术优势:


l   可实现特定DNA区域的甲基化修饰;

l   甲基化修饰效率可达80%以上;

l   可实现高效的基因表达调控。

实验流程:

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载体信息:

载体信息.png

方案选择:



修饰效率

实验周期

优点

缺点

PB转座酶整合方案

操作方便

不适用于转染效率低的细胞

慢病毒感染方案

较长

能感染大部分难转染细胞

需要包装慢病毒,不适用于大片段敲除

瞬时转染方案

较长

外源基因不整合

修饰效率相对较低

服务标准:

客户提供:

1、目的修饰位点基因信息;

2、目的细胞(可选择由派致代购);

3、完全培养基1-2 L(派致提供DMEM及1640常规培养基)。


云生物交付:按指定方案构建的细胞系及项目报告。

交付周期:8-20周,具体时间取决于靶点复杂程度及细胞生长情况。